绿叶中色素的提取和分离实验(如何提取植物色素(包括:器材、药品))
一般考点1、加入二氧化硅的原因:有利于充分研磨2、加入碳酸钙的原因:防止色素破坏。研磨时会破坏溶酶体,溶酶体里面的有机酸会流出来而色素中有Mg,碳酸钙能和酸反应,防止酸和镁反应,破坏了色素。
3、加入无水乙醇的原因:光合色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中,可以用无水乙醇提取绿叶中的光合色素。4、层析液的作用:光合色素可溶于层析液中,不同的光合色素在层析液中的溶解度不同。
溶解度高的光合色素随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的光合色素在滤纸上扩散得慢。这样,最终不同的光合色素会在扩散过程中分离开来。(1)提取光合色素用天平称取5 g绿色叶片,剪碎,放入研钵中。向研钵中放入少量二氧化硅和碳酸钙,加入10 mL无水乙醇(也可用丙酮),迅速、充分地研磨。在玻璃漏斗基部放一块单层尼龙布,将漏斗插入试管。将研磨液倒入漏斗,及时用棉塞塞严盛有滤液的试管。
①剪碎和加二氧化硅的作用:利于研磨充分②加入碳酸钙的原因:防止色素破坏。研磨时会破坏溶酶体,溶酶体里面的有机酸会流出来而色素中有Mg,碳酸钙能和酸反应,防止酸和镁反应,破坏了色素。
③加入无水乙醇(丙酮)的原因:光合色素易溶于无水乙醇等有机溶剂中,可以用无水乙醇提取绿叶中的光合色素。
④迅速研磨:防止乙醇挥发和色素的破坏。
⑤单层尼龙布的作用:过滤、去除杂质。
⑥用棉塞塞严的原因:防止乙醇(丙酮)挥发、提取液变少、变干。
(2)制备滤纸条将干燥的定性滤纸剪成长与宽略小于试管长与宽的滤纸条,将滤纸条一端剪去两角,在此端距顶端1 cm处用铅笔画一条细横线。
①滤纸条的长与宽略小于试管:既能使滤纸条轻松地放入试管内,易于取出,也能防止滤纸条太小,弯曲塌陷在试管内。
②剪去滤纸条两角的作用:
1.保证滤纸能立在烧杯中2.保证滤纸上的滤液线能水平向上扩展。
③1 cm:保证滤纸条有足够的长度泡在层析液中,又能使色素带不浸在层析液(分离液)中。
④用铅笔,不能用签字笔、圆珠笔、画笔的原因:签字笔、圆珠笔、画笔的笔液色素会也能溶于乙醇和层析液,污染从绿叶中提取的色素。
(3)画滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线均匀画细线(也可用玻片较短那一端的边缘沾取滤液后,印在滤纸条上)。
待滤液线干后,重复画线一两次。①滤液线要细,要均匀:保证滤液色素在同一起始点上。
②待滤液线干后再重复画线的原因:既保证了滤液线的色素量,也防止滤液线过宽。画的次数越多,色素量越多,越好跑,色素带也就分得越开,越清楚。
(4)分离光合色素将适量的层析液(分离液)倒入试管,将滤纸条画线一端朝下,轻轻插入层析液中,迅速塞紧试管口。①适量的层析液:保证足量用于色素的分离,防止层析液浸没滤液线,也防止空气污染(层析液易挥发、有毒),避免试剂的浪费。
②层析液的作用:色素可溶于层析液中,不同的色素在层析液中的溶解度不同。
溶解度高的色素随层析液在滤纸上扩散得快;溶解度低的色素在滤纸上扩散得慢。
这样,最终不同的色素会在扩散过程中分离开来。
③注意不要让层析液触及滤液线。接触后会使大量滤液溶于层析液中,导致实验失败。
④塞紧试管口的原因:层析液易挥发,且具一定的毒性。(5)观察、记录待层析液上缘扩散至接近滤纸条顶端时,将滤纸条取出,风干。观察滤纸条上所出现的色素带及其颜色,并做好记录。最后滤纸条上将分离出四条色素带,颜色从上往下分别是橙黄色、黄色、蓝绿色和黄绿色,四种色素分别是胡萝卜素、叶黄素、叶绿素a和叶绿素b。